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Lipo2000转染试剂
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- 产品描述
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Lipo2000转染试剂
产品编号：DIB034-1.5ml DIB034-0.75ml
产品规格：1.5ml 0.75ml
保存：2-4℃保存一年。（避免冷冻）
产品说明:
Data Invention Biotech 独有专利配方Lipo2000转染效率介于Lip2000和Lip3000之间，毒性更低，转染效率更高，是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。
质粒DNA的转染:对大多数细胞来说，DNA(µg)与Lipo2000 (µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。
1. 以24孔板为例
贴壁细胞： 转染前一天，用500 µl不含抗生素的培养基接种0.5～2×105细胞，使之第二天能达到70-90%汇合。
悬浮细胞：在准备DNA-Lip2000复合物之前，用500 µl不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。
2. 对每个转染样品，进行以下操作
a. 在eppendorf管里分别加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA轻柔混匀，制成DNA稀释液。
b. 在另一个eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µl Lipo2000(注意用前先混匀)，轻柔混匀，制 成Lip2000 稀释液，室温静置5分钟。
c. 将DNA稀释液和Lip2000稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟， 形成DNA-Lip2000复合物。DNA-Lip2000复合物在室温下可稳定存在6小时。
3. 将DNA-Lip2000复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。
4. 在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18～48小时。
5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加 入选择性培养基进行筛选。
质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和Lip2000的比例以及细胞密度进行优化，一 般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA (µg)和Lip2000 (µl) 的比例。
不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及Lipo2000用量
不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及Lipo2000用量
| 细胞培养板 | 每孔面积 | 培养基用量 | DNA转染 | siRNA | |||||||
| 铺板培养基用量 | 稀释培养基用量 | ||||||||||
| 96-well | 0.3cm2 | 100ul | 2*25ul | 0.2ug | 0.5ul | 5pmol | 0.25ul | ||||
| 24-well | 2cm2 | 500ul | 2*50ul | 0.8ug | 2ul | 20pmol | 1.0ul | ||||
| 12-well | 4cm2 | 1ml | 2*100ul | 1.6ug | 4ul | 40pmol | 2.0ul | ||||
| 6-well | 10cm2 | 2ml | 2*250ul | 4ug | 10ul | 100pmol | 5ul | ||||
| 60-mm | 20cm2 | 5ml | 2*0.5ml | 8ug | 20ul | 200pmol | 10ul | ||||
| 10-cm | 60cm2 | 15ml | 2*1.5ml | 24ug | 60ul | 600pmol | 30ul | ||||
常见细胞的转染效率（仅供参考，实验条件不同转染效率会有差别）
| 细胞种类 | HEK293 | HCT116 | WRL-68 | HepG2 | NH/3T3 | THP-1 | Hela | MCF-7 | 293T | TS cell | HO1980 | A549 |
| 转染效率 | ＞80% | ＞80% | ~80% | ~80% | ~80% | ＞50% | ＞80% | ＞80% | ＞80% | ＞60% | ＞60% | ＞80% |
| 细胞种类 | MEF | Chok1 | Hep3B | C2C12 | Neuro-2a | HUVEC | MDCK | Hep2C | WHI | B50 | Calu1 | L929 |
| 转染效率 | ＞50% | ＞50% | ＞80% | ＞80% | ＞70% | ＞80% | ＞80% | ＞80% | ＞80% | ＞70% | ＞70% | ＞70% |
产品参数
| Name | Lipo2000转染试剂 | ||||||||||
| CAT# | DIB034-1.5ml DIB034-0.75ml | ||||||||||
| CAS# | N/A | ||||||||||
| Storage# | 4℃干燥避光 | ||||||||||
| Shelf Life# | 12个月 | ||||||||||
| Ex(nm)# | N/A | ||||||||||
| Em(nm)# | N/A | ||||||||||
| MW# | N/A | ||||||||||
| Solvent# | N/A | ||||||||||
