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产品分类
dib® 2×Taq Master Mix
dib® 2×Taq Master Mix

dib® 2×Taq Master Mix

  • 产品描述
■ 产品说明:
本制品是将PCR反应所需的Taq酶、dNTPs、MgCl2以及反应缓冲液预先配制成2倍浓度的混合物。2×Taq Master Mix专为常规PCR扩增反应优化,扩增长度可达8kb,能对4kb及其以下长度的片段进行高效地扩增。使用时只需再加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,大大地简化了操作过程,减少了PCR操作过程中的污染。2 × Taq Master Mix提供普通型/快速上样型两种形式供您选择。经测试,染料的加入不影响PCR反应,在PCR反应完成后可直接电泳,节省时间。使用本试剂扩增得到的PCR产物3´端有一突出"A"碱基,可直接克隆于T载体中。
■ 产品特点:
高效:以λDNA为模板,扩增长度可达8kb,能高效扩增≤4kb片段
灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
稳定:反复冻融几十次,4℃放置30天,室温放置一周后,扩增性能不受影响。
快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。
便利:PCR反应后可直接电泳(含染料形式)。
产品用途
    1)常规PCR鉴定;
    2)小片段目标基因克隆;
    3)平端PCR产物加A。
■ 保存:
 -20 ℃,保质期2年
■  产品包装(A包装):

产品组成      体积
2×Taq Master Mix                             1ml×5
PCR Mix              50μl
*PE012-02系列含上样染
 
■  质量保证
经检测无外源核酸酶残留,qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
 
 
 
 
 
 操作方法:
常用反应体系(50μl):

2 × Taq Master Mix* 25μl
上游引物 0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物 0.2-1.0μM(终浓度)
模板
 
Taq
1-50ng(质粒)
10ng-1μg(基因组)
0.25μl(1.25U)
ddH2O 至50μl
*Mg2+终浓度为2mM
常用PCR循环:
当扩增片段<3K;

94℃, 1分钟30秒
  94℃,20秒
30次循环: 50~60℃,20秒
  72℃,1kb/60秒
72℃ 5分钟
4℃ 保温
   
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp);
94℃, 5分钟
30次循环: 94℃,5秒
68℃,1kb/60秒
72℃ 5分钟
4℃ 保温
 
注意事项
  1)需要溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
  2)菌液PCR时预变性时间≥5min,更有利于破壁。
  3)应根据实验目的选择合适的循环数,循环数过少,会造成扩增量不足;循环数过多,扩增量增加,但突变率也会增加,并造成非特异性扩增。
  4)根据引物Tm值设置合适退火温度,退火温度过低,会造成非特性扩增;过高可能扩增不到。

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